用什么熒光燈可以看GFP綠色熒光蛋白?
LUYOR-3415RG便攜式雙波長熒光燈可與熒光蛋白觀察眼鏡luv-30A或 luv-50A一起使用直接觀察綠色熒光蛋白(GFP)或紅色熒光蛋白(RFP)。激發(fā)光源與觀察眼鏡LUV-30A共同使用渠脉,可在動物設(shè)備的固定位置如層流柜直接觀察綠色熒光蛋白(GFP)宇整。LUYOR-3415RG激發(fā)光源使用鋰電池組供電,可與觀察鏡luv-30A 或 luv-50A一起使用直接觀察綠色熒光蛋白(GFP)或黃色熒光蛋白(YFP)芋膘。
綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein鳞青,GFP)
綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)是一類存在于腔腸動物體內(nèi)的生物發(fā)光蛋白为朋。GFP具有多種優(yōu)點:易于檢測盼玄,靈敏度高;熒光性質(zhì)穩(wěn)定潜腻,耐受性強;易于表達器仗,無細(xì)胞毒性融涣;可用于活細(xì)胞檢測。因此精钮,GFP可作為報告基因用于檢測基因表達或調(diào)控威鹿,或作為融合標(biāo)簽來檢測蛋白質(zhì)分子的定位、遷移轨香、構(gòu)象變化以及分子間的相互作用忽你,或者靶向標(biāo)記某些細(xì)胞器。
GFP吸收的光譜峰值為395nm(紫外)臂容,并有一個峰值為470nm的副吸收峰(藍(lán)光)科雳;發(fā)射光譜峰值為509nm(綠光)根蟹,并帶有峰值為540nm的側(cè)峰(Shouder)。雖然450~490nm只是GFP的副吸收峰糟秘,但由于該激發(fā)光對細(xì)胞的傷害更小简逮,因此通常多使用該波段光源(多為488nm)。此外尿赚,GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽(FITC)很相似散庶,兩者通常共有一套濾光片。GFP熒光極其穩(wěn)定凌净,在激發(fā)光照射下悲龟,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比熒光素強,特別是在450~490nm藍(lán)光波長下更穩(wěn)定冰寻。
類似的须教,GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠(yuǎn)比熒光素標(biāo)記的熒光抗體高,抗光漂白能力強性雄,因此更適用于定量測定與分析没卸。由于GFP熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物,因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報告蛋白秒旋,其作用是任何其它酶類報告蛋白無法比擬的约计。但因為GFP不是酶,熒光信號沒有酶學(xué)放大效果迁筛,因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白煤蚌,比如螢火蟲熒光素酶等。
觀察GFP熒光蛋白方法有:
1.便攜式GFP激發(fā)光源:
采用便攜式GFP激發(fā)光源(又叫熒光蛋白觀測鏡)是zui便捷细卧、zui方便的觀察方法尉桩,因GFP在470nm有一個很高的吸收峰,采用 470nm激發(fā)光源能夠激發(fā)GFP發(fā)出明亮的綠色熒光贪庙,在觀察gfp熒光時蜘犁,因為激發(fā)光為強烈的藍(lán)色光線,必須佩戴專業(yè)的觀察眼鏡才能觀察到清晰的熒光信號止邮。推薦使用美國路陽LUYOR-3415或LUYOR-3410便攜式激發(fā)光源这橙。
上圖為采用便攜式GFP激發(fā)光源觀察到的效果
2. 紫外光源(紫外熒光燈):
采用紫外光源(又叫紫外線燈、黑光燈)觀察也非常方便导披,但如果觀察植物屈扎,植物葉片的葉綠色在紫外線燈下也會發(fā)出熒光,對gfp發(fā)出的熒光也會產(chǎn)生干擾撩匕,另外鹰晨,標(biāo)本長時間在紫外光源照射下對GFP標(biāo)本組織也會造成破壞。
LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源可野外、實驗室原位測定GFP(綠色熒光蛋白)模蜡。通過定點觀察GFP漠趁,可有利于學(xué)習(xí)如何操縱和提高有用的染色體特性,從而可以篩選出高基因表達的植物哩牍。
LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源的應(yīng)用:
1棚潦、 野外、實驗室原位測定GFP(綠色熒光蛋白)膝昆。
2丸边、 應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因作物研究。
3荚孵、 區(qū)別可遺傳性改良生物體和不可遺傳的改良生物體妹窖。
4、 用于基因表達的研究收叶。
5骄呼、 用于Rhodamine(紅色熒光染料)、葉綠素判没、熒光素的研究蜓萄。