核酸分子雜交儀使用說明

進口醫(yī)用全自動核酸分子雜交箱概念及原理

概念：核酸分子雜交是根據(jù)堿基互補原理眷蚓，應(yīng)用已知序列的分子探針檢測待測單鏈核酸片段堿基序列的分子生物學(xué)技術(shù)鼻种，目前廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)生物化學(xué)病毒檢測疾病診斷基因工程等學(xué)科領(lǐng)域中原理：核酸的Walson-Crick堿基互補配對原則（即A=T,GC）核酸分子雜交儀。上海峰志儀器有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)美國UVP hb-1000分子雜交箱沙热。

核酸分子雜交技術(shù)的分類
核酸分子雜交技術(shù)可按雜交環(huán)境分為固相雜交和液相雜交兩大類
1固相雜交

固相雜交即先將待測單鏈核酸樣品結(jié)合到支持物（常用有硝酸纖維素濾膜尼龍膜化學(xué)活化膜等）上叉钥，然后與溶液中的已知序列的標記探針進行雜交。固相雜交的特點：固相雜交后篙贸，未雜交的游離片段易除去投队，從而使膜上留下的雜交分子較易檢測，并可有效避免靶DNA自我復(fù)性故固相雜交技術(shù)zui為常用歉秫。
常用的固相雜交類型有：菌落原位雜交斑點雜交狹縫雜交Southern印跡雜交Northern印跡雜交組織原位雜交和夾心雜交等蛾洛。
2、液相雜交
液相雜交是指待測核酸和探針都存在于雜交液中，探針于待測核酸在液體環(huán)境中按照堿基互補配對形成雜交分子的過程液相雜交是研究zui早的雜交類型轧膘，但應(yīng)用的普遍程度較固相雜交為低钞螟。

液相雜交的特點：無需支持物待測核酸分子不用固定在支持物上其弊端是由于雜交后過量的未雜交探針存在于溶液中，在已有雜交結(jié)合物檢測水平條件下檢測誤差較高故液相雜交在過去較少應(yīng)用近年來由于雜交檢測技術(shù)的不斷進步谎碍，商業(yè)檢測試劑盒的開發(fā)等液相雜交技術(shù)得到了迅速發(fā)展鳞滨。

常用的液相雜交類型有：吸附雜交發(fā)光液相雜交液相夾心雜交復(fù)性速率液相分子雜交。
原位分子雜交實際上是固相雜交中的一種形式蟆淀，雜交過程中待測DNA處于未經(jīng)抽提的染色體之上拯啦，并在原位置上被變性成單鏈，與探針進行分子雜交熔任。
原位分子雜交與其他雜交技術(shù)主要區(qū)別在于待測堿基序列位于染色體上其主要特點是可以準確定位目的DNA在染色體上的位置因此在分子遺傳學(xué)研究癌基因定位遺傳性疾病臨床診斷方面具有重要而廣泛應(yīng)用褒链。

美國UVP HB-1000核酸分子雜交儀標準操作規(guī)程

1.目的
保證核酸分子雜交儀的正確和正常使用。
2.范圍
美國進口HB-1000核酸分子雜交儀的使用
3.職責(zé)
實驗室內(nèi)部持有PCR上崗證的人員負責(zé)儀器的使用疑苔、維護甫匹。
4.工作流程
4.1 日常使用
4.1.1 本儀器適用溫度為0-40℃，適用濕度為≤90%惦费。
4.1.2 液晶顯示界面
正常狀態(tài)顯示主界面兵迅，顯示內(nèi)容對應(yīng)實時溫度、轉(zhuǎn)速薪贫、定時倒計時時間和提示狀態(tài)等信息恍箭，當進入?yún)?shù)設(shè)定時，則顯示參數(shù)設(shè)定界面瞧省。
4.1.3 面板界面及按鍵操作說明
a）“設(shè)定”鍵扯夭，按該鍵進入“設(shè)定參數(shù)”界面，再通過按“△”或“▽”鍵選擇需要設(shè)定的“設(shè)定溫度”“旋轉(zhuǎn)速度”“定時時間”參數(shù)臀突，當光標移動到對應(yīng)參數(shù)后勉抓，再按“設(shè)定”鍵，則進入到對應(yīng)的參數(shù)設(shè)定候学，在參數(shù)設(shè)定時間完成后藕筋，按“設(shè)定”鍵，則保存相應(yīng)的設(shè)置梳码。
b）“△”或“▽”鍵隐圾，用于調(diào)整參數(shù)設(shè)定項目或在參數(shù)設(shè)定時調(diào)節(jié)設(shè)定參數(shù)值的大小，每按一次上下移動一欄或數(shù)值增加較少1掰茶。
c）“?”鍵暇藏，用于參數(shù)設(shè)定時調(diào)節(jié)參數(shù)設(shè)定的某一位，自右向左循環(huán)濒蒋，每按一次移動一位盐碱。
d）“返回”鍵把兔，參數(shù)都設(shè)定完畢后，按一下“返回”鍵瓮顽，返回到主界面县好。
e）“消音”鍵，當有提示信號出現(xiàn)時暖混，按“消音”鍵缕贡，聲提示消失，提示指示燈仍然保持拣播，同時液晶屏顯示“消音”
f）“啟動”鍵和“停止”鍵晾咪，通過操作“啟動”、“停止”鍵贮配，可控制轉(zhuǎn)架的運行與停止谍倦，對應(yīng)運行指示燈處于“亮”、“滅”狀態(tài)牧嫉。
g）“復(fù)位”鍵剂跟，如需要重新計時或重新開展一批雜交實驗時，可按“復(fù)位”鍵酣藻，則電機停止轉(zhuǎn)動，溫度保持設(shè)定溫度鳍置，定時時間恢復(fù)到初始設(shè)定狀態(tài)辽剧。

 4.1.4 使用方法
a）使用前準備，打開箱門税产，取出轉(zhuǎn)架怕轿，將離心管或雜交瓶插入轉(zhuǎn)架中，應(yīng)均衡放置辟拷。
b）將裝好試樣的轉(zhuǎn)架安裝到儀器上撞羽，觀察轉(zhuǎn)架是否固定到位。
c）檢查無誤后衫冻，關(guān)上箱門诀紊，打開電源開關(guān)，電源指示燈亮隅俘，設(shè)定工作溫度邻奠、旋轉(zhuǎn)速度、定時時間等參數(shù)为居。（儀器具有設(shè)定參數(shù)記憶功能碌宴，下次實驗如參數(shù)相同時，可不需修改參數(shù)）
d）按一下“運行”按鈕蒙畴，運行指示燈亮贰镣，儀器即按照設(shè)定的參數(shù)運行，箱體內(nèi)開始加溫，轉(zhuǎn)軸裝置按設(shè)定的速度旋碑隆，定時時間開始以0.1min為步長倒計時董朝，定時時間到時，儀器發(fā)出聲音提示干跛，并停止加熱和轉(zhuǎn)動子姜。
e）實驗過程中需停止轉(zhuǎn)動時，可按一下“停止”鍵楼入，則轉(zhuǎn)架停止轉(zhuǎn)動哥捕，箱體保持恒溫，調(diào)整工作完成后嘉熊，再按一下“運行”鍵遥赚，轉(zhuǎn)架繼續(xù)轉(zhuǎn)動，定時器只有在電機正常旋轉(zhuǎn)時工作阐肤。
f）實驗結(jié)束凫佛，按一下“停止”鍵，打開箱門孕惜，取出樣品愧薛。
g）如進行下一組樣品的試驗，按一下“復(fù)位”按鈕衫画，初始化定時時間毫炉，重復(fù)上述操作。

4.2 儀器保養(yǎng)
在核酸分子雜交儀的使用過程中削罩，請嚴格按照本操作規(guī)程規(guī)定的運行環(huán)境和操作步驟使用瞄勾，每次使用后需及時清理工作室，保持儀器外觀整潔弥激，但需避免使用強酸进陡、堿等腐蝕性清潔劑及有機溶劑清潔。

4.3 儀器的校準
溫度檢測方法：用經(jīng)過驗定合格微服，測量范圍為0-100℃的玻璃水銀溫度計趾疚。
4.3.1設(shè)定一個溫度控制值（高于室內(nèi)溫度5-80℃），調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速职辨，運行儀器30min盗蟆，直到顯示的數(shù)值和設(shè)定的數(shù)值一致。
4.3.2透過門上的玻璃舒裤，觀察溫度計上顯示的刻度喳资，獲得箱內(nèi)的準確溫度。
4.3.3比較這兩個數(shù)值腾供，如相差1℃以上仆邓，請于廠家聯(lián)系鲜滩。
4.4 故障分析與處理
4.4.1打開電源開關(guān)，儀器電源指示燈不亮节值，應(yīng)首先檢查儀器電源連接是否良好徙硅，如連接良好，請切斷電源線搞疗，并用工具打開保險絲座嗓蘑，查看保險絲是否斷路，如保險絲故障匿乃，請及時更換保險絲桩皿。
4.4.2在通電狀態(tài)下，當本設(shè)備不能正常工作時幢炸，請先觀察設(shè)定溫度設(shè)定是否超過環(huán)境溫度+5℃泄隔，如未超過請重新設(shè)置。
4.4.3如出現(xiàn)超溫提示宛徊，先待箱體溫度冷卻至設(shè)定溫度以下后佛嬉，再重新觀察，如果仍然出現(xiàn)闸天， 則一般為設(shè)備故障暖呕。
4.4.4如排除上述問題，儀器仍不能正常工作号枕，請及時與廠家聯(lián)系維修缰揪。

美國UVP HB-1000核酸分子雜交儀操作注意事項 

分子雜交儀又稱分子雜交爐、分子雜交箱葱淳，根據(jù)不同實驗的需要可以選擇不同的規(guī)格型號。它是現(xiàn)代實驗室采用雜交技術(shù)的理想設(shè)備抛姑，可替代塑料雜交袋和水浴搖床赞厕，從而避免雜交袋破損帶來的污染危險。雜交爐具有微機控溫定硝，爐內(nèi)空氣循環(huán)裝置設(shè)計獨特皿桑，升溫速度快等特點。

分子雜交儀由箱體蔬啡、雜交瓶轉(zhuǎn)架或離心管轉(zhuǎn)架诲侮、雜交管、搖床箱蟆、隔膜沟绪、電腦控制系統(tǒng)等部件組成，如圖所示空猜。不同型號的箱體容納的管子數(shù)绽慈、微孔版數(shù)恨旱、載玻片數(shù)和平板數(shù)也不同。
核酸分子雜交技術(shù)根據(jù)堿基互補配對原則坝疼，在一定條件下用標記的已知DNA或RNA片段（探針）來檢測樣本中是否有待測的核酸序列 [1] 搜贤。
生理條件下DNA呈穩(wěn)定的雙鏈螺旋結(jié)構(gòu)，在體外钝凶，當有變性因素存在時(如溫度超過65℃仪芒、含胺或極端pH時)，DNA分子內(nèi)部的氫鍵斷裂耕陷，解離成兩條單鏈DNA掂名，這種現(xiàn)象稱為變性。在除去變性因素后啃炸，單鏈DNA能通過堿基互補再結(jié)合成穩(wěn)定的雙鏈螺旋結(jié)構(gòu)铆隘，此過程稱為復(fù)性或退火。

在復(fù)性過程中南用，若存有與樣本核酸某部分序列相同或高度同源的外源性單鏈DNA片段或寡核苷酸(一般為17～45個堿基)時膀钠，兩者可通過互補堿基形成雜交體，即雙鏈DNA分子裹虫，這一過程稱為雜交肿嘲。用一段已知的DNA片段加入復(fù)性的DNA中，若能夠結(jié)合成雙鏈分子筑公，說明樣本中含有已知的DNA序列雳窟。

核酸分子雜交不僅發(fā)生在DNA與DNA之間，也可發(fā)生在RNA與RNA匣屡、RNA與DNA之間封救。生成的雜交體分別為 DNA-DNA、 RNA-RNA或 RNA-DNA的雙鏈結(jié)構(gòu)

注意事項:
1. 分子雜交儀需要安裝在有良好接觸的電源插座上捣作。
2. 恒溫室處于高溫狀態(tài)下裝取雜交管時誉结，注意不要燙傷。
3. 雜交管在裝入反應(yīng)液前一定要清洗干凈券躁，裝入反應(yīng)液及反應(yīng)膜后一定要擰緊瓶蓋惩坑，以免漏液。
4. 在進行同位素標記的雜交實驗時也拜，必須檢查雜交管的密封情況以舒，以免造成污染。一旦發(fā)生污染慢哈，請及時告知有關(guān)部門的使用人員和檢修人員蔓钟，盡可能的減少不必要的傷害。
5. 由于分子雜交儀設(shè)計結(jié)構(gòu)緊湊岸军，密封性要求高奋刽，所以在儀器運行中出現(xiàn)故障需要檢修時瓦侮，應(yīng)切斷電源由專業(yè)技術(shù)人員進行。