很多做研究的老師和同學(xué)判没，在使用路陽(yáng)的熒光蛋白激發(fā)光源時(shí)候遇到拍照問題蜓萄，明明用熒光蛋白觀察眼鏡能夠清晰看到熒光蛋白的表達(dá)，但很的單反相機(jī)拍不出來的熒光照片澄峰〖倒粒總覺得熒光蛋白的拍照濾鏡有問題，今天俏竞，我們工程師將單反相機(jī)拍熒光照片的基礎(chǔ)知識(shí)給大家普及一下绸硕。
因單反相機(jī)是非常智能的相機(jī)，大家使用時(shí)候基本都是調(diào)整到auto檔位魂毁，相機(jī)能夠感知環(huán)境光線的明暗玻佩，自動(dòng)調(diào)整曝光參數(shù)。拍出來的照片非常nice席楚。但熒光圖像拍照環(huán)境和常規(guī)照片不一樣咬崔，熒光拍照時(shí)候，有強(qiáng)烈的激發(fā)光烦秩，需要用熒光拍照濾鏡將激發(fā)光過濾掉垮斯，讓熒光蛋白的熒光成像，有時(shí)候熒光表達(dá)的不是很亮只祠，我們需要調(diào)整單反相機(jī)的ISO兜蠕、快門速度和光圈大小。下面將這幾個(gè)參數(shù)給大家做一個(gè)簡(jiǎn)單介紹：
熒光拍照需要的設(shè)備：
激發(fā)光源抛寝、拍照濾鏡熊杨、單反相機(jī)、三腳架墩剖。
安裝轉(zhuǎn)接環(huán)
如果您的單反相機(jī)鏡頭不是67mm猴凹，需要一個(gè)轉(zhuǎn)接環(huán)才能安裝到相機(jī)鏡頭上。鏡頭尺寸一般標(biāo)注在鏡頭的zui前面一般標(biāo)注為Φxx mm岭皂，如右圖為直徑77mm的鏡頭郊霎。先把轉(zhuǎn)接環(huán)旋到鏡頭上，再把濾鏡旋到轉(zhuǎn)接環(huán)上即可爷绘。
單反相機(jī)的撥輪：
4. 熒光攝影主撥輪選擇M檔
模式轉(zhuǎn)盤的檔位介紹：
全自動(dòng)拍攝模式：此模式也叫傻瓜模式书劝，不用設(shè)置任何參數(shù)直接可以拍攝照片。
P檔程度模式：也叫自動(dòng)可調(diào)模式土至，自動(dòng)檔购对，快門、光圈由相機(jī)來設(shè)定陶因，也可以自己調(diào)節(jié)骡苞。
TV快門優(yōu)先：快門優(yōu)先多用于拍攝運(yùn)動(dòng)的物體上，特別是在體育運(yùn)動(dòng)拍攝中zui常用。
AV光圈優(yōu)先：光圈優(yōu)先是一種曝光控制模式解幽，適合拍攝人像 微距贴见。
M檔手動(dòng)曝光：手動(dòng)曝光模式，通過前撥輪設(shè)置快門速度躲株，背面的快速轉(zhuǎn)盤設(shè)置光圈大小片部。
B檔快門：就是B門，長(zhǎng)時(shí)間曝光或拍夜景用霜定。即不松手快門不關(guān)閉档悠。（須用三角架和快門線，否則影像發(fā)虛）同時(shí)通過前撥輪或背面的快速轉(zhuǎn)盤還可調(diào)整光圈參數(shù)望浩。
C檔：用戶自定義模式辖所。
SCN全自動(dòng)場(chǎng)景模式（人像風(fēng)景夜景等多種拍攝模式）
CA創(chuàng)意自動(dòng)：在此模式下用戶可以通過菜單調(diào)整圖像亮度、景深曾雕、照片風(fēng)格等功能設(shè)置奴烙。
5.光圈：
光圈是一個(gè)用來控制光線透過鏡頭，進(jìn)入機(jī)身內(nèi)感光面的光量的裝置剖张，通常在鏡頭內(nèi)。通俗講就是光圈像一個(gè)門一樣揩环，門大進(jìn)光多搔弄，照片越亮；門小進(jìn)光少丰滑，照片越暗顾犹。
表達(dá)光圈大小用F值:
完整的光圈值系列如下： F1， F1.4褒墨， F2炫刷， F2.8， F4郁妈， F5.6浑玛， F8， F11噩咪， F16顾彰， F22， F32胃碾， F44涨享， F64
數(shù)值越小，進(jìn)光量越大（光圈越大）仆百，數(shù)值越大厕隧，進(jìn)光量越小（光圈約小）
光圈兩大作用：控制進(jìn)光量吁讨，控制景深
如何調(diào)整光圈：
佳能單反相機(jī)在M檔的時(shí)候撥動(dòng)付撥盤可調(diào)整快門速度髓迎，按住AV按鈕并轉(zhuǎn)動(dòng)付撥輪調(diào)整光圈大小。
佳能60D是先按住Q鍵挡爵，再轉(zhuǎn)動(dòng)付撥輪
6. ISO調(diào)整：熒光拍攝建議選擇ISO200
ISO：（International Organization for Standardization的縮寫）
在膠片時(shí)代竖般，膠片的感光度就是指底片對(duì)于光線的敏感程度，也可以理解為底片對(duì)于光線的反應(yīng)速度茶鹃。如今的ISO也是指相機(jī)中CMOS圖像感應(yīng)器對(duì)光線的敏感度涣雕。ISO對(duì)于成片zui終的清晰度起到至關(guān)重要的作用。在M（Manual Exposure）檔下闭翩，能夠控制照片曝光量的就只有光圈挣郭、快門速度與ISO三項(xiàng)數(shù)值。
1. 光圈越大疗韵，進(jìn)入相機(jī)的光就越多兑障。光圈越小，進(jìn)入相機(jī)的光就越少蕉汪。
2. 快門速度越慢流译，進(jìn)入相機(jī)的光就越多≌甙蹋快門速度越快福澡，進(jìn)入相機(jī)的光就越少。
3. ISO越低照片越暗驹马，ISO越高照片越亮革砸。ISO越低噪點(diǎn)越少，ISO越高噪點(diǎn)越多糯累。
在保證照片正常曝光的情況下算利，ISO越低越好。
ISO怎么設(shè)置：
按下ISO檔位泳姐，并旋轉(zhuǎn)手柄輪盤效拭，調(diào)到相應(yīng)ISO
7. 熒光攝影建議設(shè)置的參數(shù)：
選擇M檔：關(guān)閉閃光燈，ISO200,光圈F5.6,快門1/60
因單反相機(jī)的鏡頭尺寸不一樣仗岸，按鍵設(shè)置不同允耿，參數(shù)設(shè)置會(huì)有差異。
建議大家ISO200下扒怖，分別調(diào)整光圈和快門速度较锡，找到一個(gè)理想設(shè)置參數(shù)。
拍GFP熒光照片時(shí)候盗痒，有LUV-495A和LUV-520A兩種拍照濾鏡可選蚂蕴，LUV-495A不能隔離葉綠素的熒光低散。LUV-520A是窄帶濾色片，拍出來是純綠的圖片骡楼，效果對(duì)比如下:大家也可參考《熒光蛋白拍照濾鏡LUV-495A和LUV-520A的區(qū)別》
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